重組人纖溶酶原激活劑（hPA）能夠高效特異性地溶解血栓，目前已培育成功rhPA轉(zhuǎn)基因兔，作為乳腺生物反應(yīng)器批量生產(chǎn)藥物。某科研團(tuán)隊(duì)構(gòu)建的PCL25/hPA重組質(zhì)粒如圖1所示（該質(zhì)粒以β-casein作為調(diào)控序列，以CMV為啟動(dòng)子，圖1中SadⅠ、XhoⅠ、NotⅠ所在位置表示相關(guān)限制酶切點(diǎn)），圖2為培育rhPA轉(zhuǎn)基因兔時(shí)用的乳腺特異性表達(dá)載體及PCR檢測(cè)原理圖（PCR-F、PCR-R為引物序列）。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）據(jù)圖1推測(cè)，PCL25/rhPA重組質(zhì)粒是在PCL25質(zhì)粒的 XhoⅠXhoⅠ限制酶切位點(diǎn)處插入化學(xué)合成的rhPAcDNA片段構(gòu)建而成。rhPA基因上游的CMV能被 RNA聚合酶RNA聚合酶識(shí)別并結(jié)合，從而開啟轉(zhuǎn)錄過(guò)程。
（2）為獲得圖2的乳腺特異性表達(dá)載體需用 SalⅠ和NotⅠSalⅠ和NotⅠ切割PCL25/rhPA重組質(zhì)粒使之線性化。PCR-F和PCR-R設(shè)計(jì)時(shí)依據(jù)的是 CMV和rhPA基因的部分脫氧核苷酸序列CMV和rhPA基因的部分脫氧核苷酸序列序列。
（3）對(duì)實(shí)驗(yàn)得到的1～6號(hào)仔兔進(jìn)行PCR及產(chǎn)物檢測(cè)，得到圖3所示結(jié)果，則成功導(dǎo)入rhPA基因的仔兔有 2、3、5、62、3、5、6。（注：M道條帶可作為雙鏈線狀DNA分子量大小的參照，7道為顯微注射片段PCR擴(kuò)增產(chǎn)物作陽(yáng)性對(duì)照）
（4）生長(zhǎng)激素（GH）可促進(jìn)動(dòng)物細(xì)胞增殖和乳腺生長(zhǎng)發(fā)育及維持泌乳。研究人員將GH基因?qū)雛hPA單轉(zhuǎn)基因兔體內(nèi)，獲得rhPA/GH雙轉(zhuǎn)基因兔，以期提高兔乳清中的rhPA表達(dá)量。
①完成下列表格：
| 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/td> | 簡(jiǎn)要操作過(guò)程 |
| 顯微注射用基因片段的準(zhǔn)備 | 將PCL25/GH質(zhì)粒雙酶切而線性化，電冰分離不同大小分子量的基因片段，回收真核基因片段待用 |
| 對(duì)兔進(jìn)行 超數(shù)排卵 超數(shù)排卵 和同期發(fā)情處理 |
選取3只未發(fā)情的rhPA單轉(zhuǎn)基因兔作為供體（標(biāo)號(hào)a、b、c），適量注射FSH/hCG（兩種促性腺激素），與正常公兔配種，在母兔的 輸卵管 輸卵管 （填部位）形成受精卵。在供體兔配種的同時(shí)，選取成年健康新西蘭母兔作為受體，耳緣靜脈注射適量hCG。 |
| 雙轉(zhuǎn)基因兔的制備 | 將顯微注射基因片段導(dǎo)入受精卵的原核內(nèi)，適宜條件培養(yǎng)，胚胎移植。 |
| 轉(zhuǎn)基因兔的整合篩選 | 無(wú)菌剪取新生仔兔的耳尖組織少許，提取基因組。針對(duì)rhPA和GH兩種基因，設(shè)計(jì) 2 2 對(duì)引物進(jìn)行PCR檢測(cè)。PCR反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳，確定條帶大小是否正確。 |
| rhPA含量測(cè)定 | 分別測(cè)定 rhPA單轉(zhuǎn)基因兔和rhPA/GH雙轉(zhuǎn)基因兔 rhPA單轉(zhuǎn)基因兔和rhPA/GH雙轉(zhuǎn)基因兔 乳清中的rhPA的表達(dá)量。 |
| 樣本 | 供體兔a | 供體兔b | 供體兔c | |
| rhPA表達(dá)水平（μg?mL-1） | 42.2 | 42.8 | 15.2 | |
| 樣本 | 雙轉(zhuǎn)基因兔a1 | 雙轉(zhuǎn)基因兔a2 | 雙轉(zhuǎn)基因兔b1 | 雙轉(zhuǎn)基因兔c1 |
| rhPA表達(dá)水平（μg?mL-1） | 432 | 444 | 636 | 248 |
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，
rhPA/GH雙轉(zhuǎn)基因兔乳腺表達(dá)rhPA水平明顯高于rhPA單轉(zhuǎn)基因兔，GH可協(xié)同促進(jìn)rhPA在轉(zhuǎn)基因兔乳腺中的高效表達(dá)
rhPA/GH雙轉(zhuǎn)基因兔乳腺表達(dá)rhPA水平明顯高于rhPA單轉(zhuǎn)基因兔，GH可協(xié)同促進(jìn)rhPA在轉(zhuǎn)基因兔乳腺中的高效表達(dá)
。【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】XhoⅠ；RNA聚合酶；SalⅠ和NotⅠ；CMV和rhPA基因的部分脫氧核苷酸序列；2、3、5、6；超數(shù)排卵；輸卵管；2；rhPA單轉(zhuǎn)基因兔和rhPA/GH雙轉(zhuǎn)基因兔；rhPA/GH雙轉(zhuǎn)基因兔乳腺表達(dá)rhPA水平明顯高于rhPA單轉(zhuǎn)基因兔，GH可協(xié)同促進(jìn)rhPA在轉(zhuǎn)基因兔乳腺中的高效表達(dá)
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：36引用：3難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得。基因文庫(kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7
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