科學家從某細菌中提取抗鹽基因，轉入煙草并培育成轉基因抗鹽煙草，培育過程如圖1所示，表格所示為相關限制酶識別序列及切制位點?；卮鹣铝袉栴}：

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	Sau3AⅠ	HindⅢ
識別序列及切割位點	G↓GATCC CCTAG↑G	T↓GATCA ACTAG↑T	↓GATC CTAG↑	A↓AGCTT TTCGA↑A

（1）表中Sau3AI酶切的DNA末端與BamHI酶切的DNA末端連接，該連接序列

不一定能

不一定能

（填“能”、“不能“或“不一定能“）被BamHI酶識別。質粒和目的基因構建重組質粒時，應選用圖1中

BamHI和HindⅢ

BamHI和HindⅢ

兩種限制酶切割。
（2）若通過PCR技術擴增抗鹽基因，除了模板外還需提供

（兩種）引物、耐高溫的DNA聚合酶、原料（4種脫氧核苷酸）

（兩種）引物、耐高溫的DNA聚合酶、原料（4種脫氧核苷酸）

等物質。
（3）步驟①構建的基因表達載體，除圖I中質粒所示結構外，還需具有

啟動子、終止子

啟動子、終止子

  及目的基因：步驟②中需先用

Ca²⁺

Ca²⁺

處理農桿菌以便將重組質粒導入農桿菌細胞。
（4）基因工程中的檢測篩選是一個重要的步驟。為篩選出導入了重組質粒的農桿菌，圖2表示運用影印培養(yǎng)法（使一系列培養(yǎng)皿的相同位置上能出現(xiàn)相同菌落的一種接種培養(yǎng)方法）檢測基因表達載體是否導入了農桿菌。培養(yǎng)基中除了含有農桿菌生長繁殖所必需的成分外，A培養(yǎng)基還需加入

四環(huán)素

四環(huán)素

，B培養(yǎng)基還需加入

氨芐青霉素（或氨芐青霉素和四環(huán)素）

氨芐青霉素（或氨芐青霉素和四環(huán)素）

從而達到篩選目的。從檢測篩選的結果分析，含目的基因的是菌落

4和6

4和6

（填數字） 中的細菌。