T—DNA插入失活技術是目前使用最為廣泛的植物基因敲除手段,該技術利用農桿菌T—DNA介導轉化,將一段帶有報告基因的DNA序列整合到植物基因組DNA上,如果這段DNA插入到靶基因(待敲除基因)內部或附近,就會導致靶基因失活。回答下列問題:
(1)轉化是指 目的基因進入受體細胞內,并且在受體細胞內維持穩(wěn)定和表達的過程目的基因進入受體細胞內,并且在受體細胞內維持穩(wěn)定和表達的過程。使用T—DNA介導轉化的原因是 T—DNA能轉移到被侵染的細胞,并整合到該細胞的染色體DNA上T—DNA能轉移到被侵染的細胞,并整合到該細胞的染色體DNA上。
(2)T—DNA在植物基因組中會發(fā)生隨機整合,可利用PCR技術進行鑒定。圖1為靶基因(共900bp)部分堿基序列,經基因敲除處理后得到的三種植株的靶基因PCR擴增產物的電泳結果如圖2。
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①PCR時應加入依據(jù)靶基因序列設計的兩種引物,請寫出引物的序列 GACCTG、CAATCCGACCTG、CAATCC(每個序列寫出6個堿基即可)。除上述兩種引物外還應加入依據(jù) 報告基因報告基因序列設計的一種引物,目的是 確定含報告基因的DNA序列是否插入到靶基因中確定含報告基因的DNA序列是否插入到靶基因中。
②已知目標植物為二倍體,分析出現(xiàn)圖2中B種情況的原因是 將一對靶基因中的一個基因敲除將一對靶基因中的一個基因敲除。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定.
【答案】目的基因進入受體細胞內,并且在受體細胞內維持穩(wěn)定和表達的過程;T—DNA能轉移到被侵染的細胞,并整合到該細胞的染色體DNA上;GACCTG、CAATCC;報告基因;確定含報告基因的DNA序列是否插入到靶基因中;將一對靶基因中的一個基因敲除
【解答】
【點評】
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