白僵菌可感染農(nóng)業(yè)害蟲，常作為防治害蟲的菌劑。由于白僵菌對除草劑草丁膦敏感且殺死害蟲的能力較弱，科研人員對其進行基因工程改造，流程如圖所示。
（1）蘇云金芽孢桿菌產(chǎn)生的毒蛋白，能有效殺死害蟲。已知該基因的全部序列，科研人員通過人工合成人工合成法和PCR技術獲得大量毒蛋白基因片段。據(jù)圖分析，將毒蛋白基因和質(zhì)粒連接獲得重組質(zhì)粒1的過程需要用到的工具酶是NcoI、BamHINcoI、BamHI和DNA連接酶。
（2）重組質(zhì)粒1和Bar基因（草丁膦抗性基因）各自用XbaI酶處理，得到酶切片段。重組質(zhì)粒1的酶切片段再用去磷酸化酶處理，使末端游離的磷酸基團脫離，目的是防止重組質(zhì)粒1酶切片段自身連接重組質(zhì)粒1酶切片段自身連接。將未用去磷酸化酶處理的Bar基因與重組質(zhì)粒1連接，獲得重組質(zhì)粒2．獲得的重組質(zhì)粒2的是圖中的CC。
（3）將重組質(zhì)粒2與經(jīng)Ca2+Ca2+處理過的白僵菌菌液混合進行轉(zhuǎn)化，重組質(zhì)粒2在白僵菌細胞內(nèi)被修復。一段時間后用含有草丁膦草丁膦的平板培養(yǎng)基進行篩選，獲得含有Bar基因的重組白僵菌。
（4）提取上述重組白僵菌全部mRNA，加入逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄酶，獲得cDNA．在獲得的產(chǎn)物中加入毒蛋白基因引物進行PCR反應，用以檢測毒蛋白基因是否完成了轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄。
（5）科研人員將重組白僵菌噴涂于植物葉片上，以此飼喂饑餓處理的害蟲，記錄單位時間內(nèi)的死亡害蟲數(shù)死亡害蟲數(shù)，以判斷重組白僵菌的殺蟲效果。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】人工合成；NcoI、BamHI；重組質(zhì)粒1酶切片段自身連接；C；Ca2+；草丁膦；逆轉(zhuǎn)錄；轉(zhuǎn)錄；死亡害蟲數(shù)
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：5引用：3難度：0.6
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發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
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