植物不能代謝亞磷酸鹽(Phi),但導入并表達ptxD基因的轉(zhuǎn)基因植物可將Phi轉(zhuǎn)化為供作物生長發(fā)育所需的Pi,以獲得更高產(chǎn)量。當施用Phi時,雜草不能與ptrD轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物競爭可利用的磷,因此,ptxD轉(zhuǎn)基因植株相比于雜草有明顯的競爭優(yōu)勢。Phi不能被藻類代謝且對藻類沒有毒性,施用后不會促進赤潮的發(fā)生,對水生生態(tài)系統(tǒng)生物多樣性不構(gòu)成威脅。油菜是我國重要的油料作物,油菜田間常伴生大量雜草,嚴重影響了油菜產(chǎn)量,除草劑長期過量使用,導致全球抗除草劑雜草數(shù)量逐年增加。為控制雜草和解決除草劑過量使用帶來的問題,某研究團隊將ptxD基因轉(zhuǎn)入野生型油菜“Westar”(WT)中,獲得轉(zhuǎn)基因油菜。
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(1)為獲得大量的ptxD基因,過程b中需先加熱至90-95℃然后冷卻至55~60℃,冷卻的目的是 使引物結(jié)合到互補DNA鏈上使引物結(jié)合到互補DNA鏈上。過程b循環(huán)完成后,通常會繼續(xù)72℃延伸5-10分鐘,其目的是 使子鏈延伸完全使子鏈延伸完全。
(2)為獲得轉(zhuǎn)基因植物,本實驗采用 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法侵染油菜幼苗的下胚軸,主要過程如下:
①過程d:將重組質(zhì)粒導入農(nóng)桿菌,得到含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌菌液。
②將無菌培養(yǎng)的野生型油菜幼苗的下胚軸受體進行農(nóng)桿菌侵染,侵染結(jié)束后進行一段時間的共培養(yǎng),共培養(yǎng)的目的是 使農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA轉(zhuǎn)移至受體細胞并整合到其染色體上使農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA轉(zhuǎn)移至受體細胞并整合到其染色體上。
③過程f:共培養(yǎng)結(jié)束后轉(zhuǎn)移至相應(yīng)培養(yǎng)基上誘導愈傷。
④過程g:誘導分化、生根。
(3)本研究利用植物表達載體上的潮霉素抗性基因和 ptxDptxD基因作為篩選標記??捎贸泵顾鼗?PhiPhi作為篩選劑。
(4)若在試管苗期間通過分子水平的檢測,檢驗轉(zhuǎn)基因油菜的ptxD基因是否表達,應(yīng)檢測 是否轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生相應(yīng)的mRNA、是否翻譯產(chǎn)生相關(guān)的蛋白質(zhì)是否轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生相應(yīng)的mRNA、是否翻譯產(chǎn)生相關(guān)的蛋白質(zhì)(答兩點)
【答案】使引物結(jié)合到互補DNA鏈上;使子鏈延伸完全;農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化;使農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA轉(zhuǎn)移至受體細胞并整合到其染色體上;ptxD;Phi;是否轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生相應(yīng)的mRNA、是否翻譯產(chǎn)生相關(guān)的蛋白質(zhì)
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:19引用:2難度:0.6
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(1)基因工程中所用的目的基因可以人工合成,也可以從基因文庫中獲得?;蛭膸彀?
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