科研人員通過轉基因技術培育出超量表達P蛋白的轉基因甜玉米。在超量表達P基因載體的構建中，含P基因的DNA片段以及Ti質粒的酶切位點如圖所示，其中強啟動子能驅動基因的持續(xù)轉錄。請回答下列問題。
（1）以RNA為模板，通過RT-PCR技術可獲取P基因。進行RT-PCR時一般要加入4種脫氧核糖核苷三磷酸（dNTP）而不是脫氧核苷酸，其原因是 dNTP能為子鏈延伸過程提供能量和原料dNTP能為子鏈延伸過程提供能量和原料，同時需加入的酶有了特異性擴增P基因序列，需根據 P基因兩端的堿基序列P基因兩端的堿基序列設計特異性引物。
（2）在構建基因表達載體時，應優(yōu)先選用的限制酶是 BamHIBamHI和 SacISacI這樣操作不僅使P基因在玉米植株中超量表達，還可利用T-DNA的 可轉移可轉移特性，最終使P基因 整合到玉米細胞染色體上整合到玉米細胞染色體上。
（3）對轉基因再生玉米植株進行鑒定時發(fā)現，有些植株雖有P基因，但幾乎沒有P蛋白，造成該現象的原因可能有 基因轉化過程中強啟動子可能丟失或斷裂，未能真正轉化成功；雖然轉化成功，但是P基因保持沉默，不能有效表達基因轉化過程中強啟動子可能丟失或斷裂，未能真正轉化成功；雖然轉化成功，但是P基因保持沉默，不能有效表達。
| 限制酶 | 識別序列 |
| ClaⅠ | 5′-AT↓CGAT-3′ |
| BamHⅠ | 5′-G↓GATCC-3′ |
| HindⅢ | 5′-A↓AGCTT-3′ |
| EcoRⅠ | 5′-G↓AATTC-3′ |
| KpnⅠ | 5′-GGTAC↓C-3′ |
| SacⅠ | 5′-GAGCT↓C-3′ |
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】dNTP能為子鏈延伸過程提供能量和原料；P基因兩端的堿基序列；BamHI；SacI；可轉移；整合到玉米細胞染色體上；基因轉化過程中強啟動子可能丟失或斷裂，未能真正轉化成功；雖然轉化成功，但是P基因保持沉默，不能有效表達
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：7引用：1難度：0.5
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（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
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