基因工程可以按照人們的意愿賦予生物新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。有關(guān)操作見圖，請(qǐng)回答下列有關(guān)問題：

（1）圖中①過程所需的酶是

逆轉(zhuǎn)錄酶

逆轉(zhuǎn)錄酶

，②過程所需的酶是

限制性內(nèi)切核酸酶

限制性內(nèi)切核酸酶

。
（2）若圖中④過程為將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞，最常用的方法是

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

，該方法選擇Ti質(zhì)粒作為運(yùn)載體的原因是

Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞的染色體的DNA上，以保證目的基因穩(wěn)定存在和表達(dá)

Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞的染色體的DNA上，以保證目的基因穩(wěn)定存在和表達(dá)

。
（3）圖中⑤過程是

目的基因的檢測(cè)與鑒定（目的基因及其表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)鑒定）

目的基因的檢測(cè)與鑒定（目的基因及其表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)鑒定）

，要檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄，首先從轉(zhuǎn)基因生物個(gè)體中提取mRNA，再用相應(yīng)的基因探針進(jìn)行雜交。
（4）圖中③過程需要借助PCR技術(shù)，DNA的合成方向總是從子鏈的

5'端

5'端

向

3'端

3'端

延伸，若利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的過程中消耗了126個(gè)引物分子，則該過程DNA擴(kuò)增了

6

6

次。
（5）科研人員利用PCR技術(shù)大量擴(kuò)增某放線菌的16SrRNA保守片段，然后通過DNA序列比對(duì)進(jìn)行菌種親源關(guān)系的鑒定。
①查找數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)現(xiàn)該放線菌的16SrRNA目的基因片段及相應(yīng)限制酶識(shí)別序列如圖所示：

為了獲得16SrRNA目的基因，需要使用的限制酶是

EcoRⅠ

EcoRⅠ

和

SacⅠ

SacⅠ

。得到目的基因以后就可以利用PCR技術(shù)對(duì)16SrRNA目的基因進(jìn)行體外擴(kuò)增，此過程需要加入

TaqDNA聚合

TaqDNA聚合

酶。
②聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對(duì)引物的特異性要求較高，放線菌是一類GC含量高的細(xì)菌，設(shè)定退火溫度時(shí)需要適當(dāng)

升高

升高

（填“升高”或“降低”）溫度。