報告基因是指一類易于檢測且實驗材料本身不具備的基因。阿爾茨海默病(AD)是由淀粉樣前體蛋白(APP)過量表達導致的神經(jīng)系統(tǒng)退變性疾病,用增強型綠色熒光蛋白(EGFP)基因作為報告基因,將EGFP基因與 APP 基因融合,可方便、經(jīng)濟、快速地篩選出促進人 APP mRNA降解的藥物。研究表明,EGFP與APP 基因融合后,雖能全部轉(zhuǎn)錄但僅有 ECFP蛋白得到表達。EGFP基因與 APP 基因融合過程如圖所示。
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(1)APP751、EGFP基因的cDNA 是以其mRNA 為模板經(jīng) 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄過程形成的,將其儲存于細菌質(zhì)粒中,屬于構(gòu)建 基因文庫(部分基因文庫或cDNA文庫)基因文庫(部分基因文庫或cDNA文庫)。
(2)據(jù)圖分析,Klenow 酶的作用是 將XhaⅠ切割獲得的黏性末端催化產(chǎn)生平末端將XhaⅠ切割獲得的黏性末端催化產(chǎn)生平末端。切割 peDNA3.1質(zhì)粒獲得APP751基因時,研究人員沒有選擇直接用HindⅢ、XbaⅠ同時切割,而是歷經(jīng)①→②→③的復雜過程,原因是 直接用HindⅢ、XhaⅠ同時切割、產(chǎn)物兩端都是黏性末端、而經(jīng)過①→②→③可使目的基因兩端分別為平末端和黏性末端,才能與被SmaⅠ與HindⅢ打開的載體連接直接用HindⅢ、XhaⅠ同時切割、產(chǎn)物兩端都是黏性末端、而經(jīng)過①→②→③可使目的基因兩端分別為平末端和黏性末端,才能與被SmaⅠ與HindⅢ打開的載體連接。
(3)COS-7是來源于非洲綠猴腎成纖維細胞,培養(yǎng)這類細胞時,為保證細胞生長和避免污染,應(yīng)分別在合成培養(yǎng)基中添加 血漿、血清和抗生素血漿、血清和抗生素,傳代培養(yǎng)不宜超過 10 代,原因是 細胞在傳至10代后,增減減緩乃至停止,部分細胞的細胞核型可能發(fā)生變化細胞在傳至10代后,增減減緩乃至停止,部分細胞的細胞核型可能發(fā)生變化。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】逆轉(zhuǎn)錄;基因文庫(部分基因文庫或cDNA文庫);將XhaⅠ切割獲得的黏性末端催化產(chǎn)生平末端;直接用HindⅢ、XhaⅠ同時切割、產(chǎn)物兩端都是黏性末端、而經(jīng)過①→②→③可使目的基因兩端分別為平末端和黏性末端,才能與被SmaⅠ與HindⅢ打開的載體連接;血漿、血清和抗生素;細胞在傳至10代后,增減減緩乃至停止,部分細胞的細胞核型可能發(fā)生變化
【解答】
【點評】
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